Actividades Laboratoriais

Actividade nº0

Questão foco: Como se pode extrair e visualizar moléculas de ADN?

Teoria: Teoria Celular

Princípios: élula é a unidade básica funcional e estrutural da vida. Esta é a unidade de reprodução, de desenvolvimento e de hereditariedade dos seres vivos.
O kiwi é um ser vivo multicelular constituído por células eucarióticas vegetais.
É no núcleo da células que se encontra guardado o DNA que está unido a proteínas específicas, as histonas, formando a cromatina. Quando as células entram em divisão celular, a cromatina condensa-se formando os cromossomas (são as características do ser vivo).
A extracção de DNA pode ser realizada a partir de diferentes tipos de células eucarióticas e consta, fundamentalmente, de duas etapas:
- Rotura das células, para libertação dos núcleos (o detergente de louça, como solvente de gorduras, dissolverá a membrana plasmática);
- Separação dos componentes básicos dos cromossomas: DNA e proteínas (função a cargo do etanol, dado que não dissolve a cromatina).O cloreto de sódio tem a função de manter a estabilidade iónica da solução.


Conceitos:
•Kiwi
•Célula eucariótica
•Acido nucleico
•DNA vegetal
•Cromatina
•Cromossoma


Acontecimentos/Objectos:
. Preparar a solução de extracção de DNA:
-Junção de 10ml de detergente de louça com 2g de cloreto de sódio;
-Adição de água destilada 70ml;
. Remoção da pele e esmagamento do kiwi até ficar como pasta;
. Adição de 10ml da solução de extracção de DNA ao preparado e misturar durante um minuto;
. Colocação de extracto no funil (com papel de filtro) e deixar verter o liquido (…)
. Filtrar novamente para o tubo de ensaio, através de um pedaço de algodão;
. Adição de etanol gelado o tubo até perfazer metade o volume do tubo;
. Inserção da vareta no tubo onde o etanol está em contacto com o extracto.


Procedimento:
1. Descasque e corte o kiwi em pequeno fragmento coloque-os no almofariz;
2. Deite o sal e o detergente num goblé com água destilada. Agite suavemente a mistura;
3. Coloque a mistura obtida no almofariz e triture;
4. Filtre, sucessivamente, o produto obtido através de papel de filtro e algodão hidrófilo;
5. Faça escorrer, lentamente, álcool refrigerado em quantidade aproximadamente igual à do filtrado ao longo da parede da proveta. Espere algum tempo (…) observar a formação de duas fases: uma superior, alcoólica, e outra inferior, aquosa.
6. O DNA, insolúvel no álcool, precipita e forma uma massa filamentosa, esbranquiçada, que contém proteínas e outros materiais com o auxilio de uma vareta, e com movimentos circulares, pode recolher algum material;
7. Para coloração, pode utilizar a técnica de Feulguen:
- Coloque o precipitado em água destilada (10s);
- Mergulhe-o em ácido clorídrico normal (15s);
- Passe novamente o material por água destilada (10s);
- Mergulhe o precipitado no reagente de Schiff (3s).


Conclusão:
Nesta experiência foi utilizado cloreto de sódio porque este proporciona ao DNA um ambiente favorável, ou seja, contribui com iões positivos que neutralizam, a carga negativa DNA.
O detergente serviu para degradar os fosfolipidos que constituem as membranas e com rotura destas, o conteúdo celular dispersam-se na solução.
Como o DNA não se dissolve no álcool, este aparece à superfície da solução (….).
O DNA ascendeu na solução visto que é menos denso que a água e a mistura aquosa (…) restos celulares.
O DNA não é visível a olho nu porque este só é visualizado no microscópio eléctrico apesar de nós conseguirmos distinguir o DNA a olho nu. Isto só ocorre porque o DNA aparece como uma massa branca e filamentosa (cromatina).





Actividade nº1

Questão foco: Quais as principais diferenças entre a fase mitótica nas células animais e nas células vegetais?

Teoria:
• Teoria celular;
• Ciclo celular;
• Teoria do ciclo

Princípios:
Multiplicação celular é a responsável pelo crescimento dos organismos e o resultadado da divisão mitótica do núcleo. A divisão do núcleo é seguido pela divisão do citoplasma logo a célula fica dividida em dois.
O ciclo celular é o processo pelo qual a célula passa desde que nasce até que se divide e é constituído por duas fases fundamentais – a interfase e a fase mitótica.
A interfase é a fase mais longa do ciclo celular e integra três fases G1, S e G2, nas quais se dá o crescimento celular e dupicação do DNA.
Na fase mitótica podemos verificar a ocorrência de duas divisões: a divisão do núcleo – mitose – e do citoplasma – citocinese. A mitose é composta por 4 fases: profase; metafase; anafase e telofase.
A profase é a etapa mais longa da mitose, onde os filamentos de cromatina se condensam. A metafase é a etapa onde se forma a placa equatorial. Na anafase dá-se a fragmentação dos centrómeros, separando-se os cromatídeos, que passam a formar um cromossoma. Na telofase acontece o contrário da profase.
Após a mitose, ocorre então a citocinese, na qual o citoplasma da célula original vai ser dividido em duas partes o que irá originar duas novas células.

Conceitos:
 Raiz da cebola ;
 Vidro de relógio;
 Lamparina de álcool;
 Laminas e lamelas;
 Material de dissecacção (agulha e bisturi);
 Acido cloridrico;
 Orceína acético;

Acontecimentos/Objectos:
1. Misture, num vidro de relógio, nove partes de orceínas acéticas com uma parte de ácido cloridrícas;
2. Corte três a seis vértices vegetativos com cerca de 20mm de comprimento: coloque-os na solução preparada em 1;
3. Aqueça o vidro de relógio, passando-o 3 ou 4 vezes sobre a chama, até se saltarem vapores. Não deixe ferver.
4. (…) e corte cerca de 1mm a partir da extremidade, rejeitando a parte restante;

Interpretação:
A interfase é a fase onde há multiplicação e deste modo tem o núcleo individualizado e com o DNA (…).
A profase é quando o material genético se organiza e os cromossomas apresentam-se curtos e espessos. Na telofase os cromossomas estão no polo da célula, reconstitui-se a membrana e o citoplasma está a dividir-se.
O ácido cloridríco serve para dissolver as lamelas medianas que unem as células umas às outras.
A orceína acética utilizou-se para dar cor às fibras.
Aqueceu-se a solução para acelerar o processo.
A célula foi estrangulada para que se separem os tecidos, só deste modo se pode visualizar.

Conclusão:
Através desta actividade laboratorial ficamos a compreender como ocorre a fase mitótica, compreendendo e visualizando os acontecimentos que os cromossomas vão sofrendo ao longo da mitose.
A fim de concluir esta actividade laboratorial com sucesso, o nosso grupo utilizou duas preparações diferentes, porém, apenas a primeira revelou melhores resultados apesar de só identificarmos a interfase e duas fases da mitose das células do ápice vegetativo da cebola porque cerca de 90% do ciclo baseia-se na interfase.



Actividade nº2

Questão foco: Quais as estratégias da rerodução assexuada em leveduras e no bolor do pão?

Teoria:
• Reprodução assexuada.

Princípios:
A reprodução assexuada permite a formação de novos individuos a partir de um só progenitor, sem que haja intervenção de células sexuais. Neste tipo de reprodução, os descendentes desenvolvem-se a partir de uma célula ou de um conjunto de células do progenitor, pelo que todos os individuos são geneticamente iguais. A produção destes individuos designa-se por clonagem.
Existem processo de reprodução assexuada, os mais comuns são: Bipartição (divisão de um ser em dois com idênticas dimensões); Gemulação (formação de uma ou mais saliências, os gomos ou gemas, que se desenvolvem e separam, originando novos seres); esporulação (formação de células reprodutoras, os esporos, cada um dos quais pode originar um novo individuo); multiplicação vegetativa (formação de novos seres a partir do desenvolver de certas estruturas vegetativas, como raízes, caule, folhas); fragmentação (separa de fragmentos do corpo, originando cada fragmento do novo indivíduo por regeneração); partenogénese (formação de novos indivíduos exclusivamente a partir do desenvolvimento de gametas femininos).

Conceitos:
 Reprodução assexuada;
 Células;
 Leveduras;
 Bolor;
 M.O.C. ;
 Progenitor;
 Lupa binocular;
 Mecânismos reprodutores;

Procedimento:
1. Retiramos uma gota de uma suspensão de leveduras, previamente preparada e montamos entre a lamina e lamela;
2. Observamos a microscópio e resgistamos num esquema;
3. Recolhemos um pedaço de pão com bolor e observamos na lupa binocular:

Interpretação:
Através dos resultados obtidos verificamos que as leveduras se reproduzem através da gemulação, visto que se formam saliências que se desenvolvem e separam e conseguem originar um novo ser. No entanto, o bolor do pão reproduz-se graças à esporuação, já que através das células reprodutoras formadas (esporos), cada pode originar um novo individuo.

Conclusão:
Concluimos que os fungos e as leveduras podem-se reproduzir assexuadamente por esporulação e por gemulação, repectivamente relativamente aos dois processos reprodutivos existem diferenças a nível morfológico, o bolor do pão apresenta um aspecto filamentoso, já as leveduras apresentam uma forma oval. Podemos então concluir que as leveduras e o bolor do pão têm estruturas morfoógicas diferentes, assim como formas distintas de se reproduzirem.



Actividade nº3

Questão foco: Como ocorre a reprodução sexuada nas plantas com flor?

Teoria:
• Reprodução sexuada nas plantas com flor.

Princípios:
Na reprodução sexuada nas plantas com flor é necessário a ocorrência de polinzação ou transporte de grãos de polén para os orgãos femininos da mesma flor, carpelos, ou então para os das outras plantas da mesma especie. Nas anteras, orgãos sexuais masculinos, tem sacos polínicos (local onde se formam os grão de pólen),e nos carpelos, orgãos femininos, existem os óvulos.
As plantascom flor contém dois orgãos reprodutores, osestames e os carpelos. O estame é constituído pela antera e o filete e o carpelo pelo estigma, estilete e ovário.

Conceitos:
 Flor;
 Reprodução sexuada;
 Estame;
 Antera;
 Filete;
 Carpelo:
 Estigma;
 Estilete;

Procedimento:
1. Observou-se a flor do tabuleiro, efectuou-se um esquema legendando essa flor;
2. Cortou-se um estame, e observou-se à lupa fez-se um esquema legendado;
3. Efectuou-se um corte transversal da antera , observou-se à lupa e fez-se um esquema;
4. Cortou-se um carpelo e fez-se um esquema legendado;

Interpretação:
Através dos resultados podemos dizer e visualizar que a flor contém orgãos sexuais femininos e masculinos. O orgão feminino é o carpelo e é constituido pelo estigma, estilete e ovário e neste último é formado os gametas femininos. Nos orgãos masculinos (estame) é produzido sacos polinicos onde são produzidos grãos de pólen.

Conclusão:
Com este trabalho podemos observar a constituição de uma planta com flor e os seus respectivos orgãos sexuais. A experiência foi realizada conforme era esperado e os resultado corresponderam com a teoria.